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ELISA試劑盒試驗前做好對照很首要

更新時間:2018-05-24      瀏覽次數(shù):1808

ELISA試劑盒試驗固相載體的選擇:很多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。
包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,懇求純度要好,吸附時通常懇求PH在9.0~9.6之間。
吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18~24小時。
有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應留心防護。
其方法可所以凹孔平板、試管、珠粒等。
如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。
不管何種載體,在運用前均可進行選擇:用等量抗原包被,在同一試驗條件下進行反應,查詢其顯色反應是不是均一性,據(jù)此判明其吸附功能是不是出色。
正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證試驗作用的性。

ELISA試劑盒試驗條件的選擇
在ELISA中,進行各項試驗條件的選擇是很首要的,其間包括:
有條件者應運用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是如今較為滿意的供氫體。
底物作用一段時間后,應參與強酸或強堿以中止反應。
通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。
底物運用液有必要新鮮制造,尤其是H2O2在臨用前參與。
然后再固定其它條件或采納“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式試驗系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
有時本底較高,說明有非特異性反應,可選用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇懇求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。
蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不一樣的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相一起,查詢陽性標本的OD值。
選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。關于多數(shù)蛋白質來說通常為1~10μg/ml。

ELISA試劑盒試驗酶符號抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定(見酶符號抗體部份)。

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