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植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個細節(jié)

更新時間:2019-09-24      瀏覽次數(shù):1597
   植物Elisa試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被植物活性氧(ROS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的植物活性氧(ROS)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
  植物Elisa試劑盒需要遵循這幾個細節(jié):抗原或抗體能吸附于固相載體外表,并堅持其免疫學活性,抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接形成酶結合物,而此種酶結合物仍能堅持其免疫學和酶學活性;酶結合物與相應抗原或抗體結合后,可根據(jù)參加底物的色彩反響來斷定是否有免疫反響的存在,并且色彩反響的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,可根據(jù)已知濃度的抗原或抗體的色彩反響的深淺制作規(guī)范曲線并依此計算出不知道樣品中抗體或抗原的濃度。
  樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的,所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事,否則后面的實驗結果無從談起。
  植物Elisa試劑盒采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度,這樣就能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。設置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度,并且要能涵蓋所要檢測實驗樣品的濃度,即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對于呈S型的標準曲線,盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
  標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點,但至少要保證有5個點。檢測標準樣品時,應按濃度遞增順序進行,以減少高濃度對低濃度的影響,提高準確性。做出的標準曲線相關系數(shù)因實驗要求不同而有所變動,但一般來說,相關系數(shù)R至少要大于0.98,對于有些實驗,至少要0.99甚至是0.999。
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